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液相色譜儀儀器校準怎么做？具體校準方法是什么？
2022-12-14 12:00
液相色譜法概述
液相色譜儀是由輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成的分析儀器。液相色譜儀是根據(jù)樣品之中各組分在色譜柱中的固定相和流動相間的分布或吸附特性的差異，流動相將樣品帶入色譜柱進行分離。由檢測器檢測，并由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄。色譜圖，根據(jù)各組分的保留時間和響應值（峰面積或峰高）進行定性和定量分析。
測量儀器校準
（1）環(huán)境條件
室溫為（15～30）℃，儀器校準過程之中溫度變化不超過3℃（對于差示折射率檢測器，室溫變化不超過2℃），室內(nèi)相對濕度：（20～85）%。房間內(nèi)不得存放易燃、易爆、強腐蝕性物品。無機械振動和電磁干擾，通風良好。
（2）儀器校準采用標準材料
a.萘-甲醇溶液標準物質(zhì)：定值為1.00×10-4g/mL，擴展不確定度小于4%，K=2
b.萘-甲醇溶液標準物質(zhì)：檢定值為1.00×10-7g/mL，擴展不確定度小于4%，K=2
c.膽固醇甲醇溶液標準物質(zhì)：標準值為200μg/mL，擴展不確定度小于2.0%，K=2。
d.甲醇之中膽固醇溶液標準品：標準值為5.0μg/mL，擴展不確定度小于5.0%，K=2。
e.膽固醇純度標準品：標準值為99.7%，擴展不確定度小于0.1%，K=2。
（3）輸液系統(tǒng)
a.泵的耐壓性：將儀器各部分連接好，以甲醇（或純水）為流動相，流速為0.2 mL/min。按說明書啟動儀器，保持壓力穩(wěn)定10分鐘，用濾紙檢查各管道接口處是否有濕痕。取下色譜柱，堵塞泵出口端（壓力傳感器上方），使壓力達到最大允許值的90%，保持5分鐘，應無泄漏。
b.泵流量設定誤差及流量穩(wěn)定性：按要求設定流速，啟動儀器，待壓力穩(wěn)定之后，用事先稱量過的清潔容量瓶在流動相出口處收集流動相，用秒表計時。收集規(guī)定時間之內(nèi)流出的流動相，在分析天平之上稱重，計算所測流速，重復儀器校準3次。
c.梯度誤差:用梯度控制裝置設置梯度洗脫程序，A溶劑為純水，B溶劑為含0.1%丙酮的水溶液。將輸液連接至檢測器（未連接色譜柱），開機后用溶劑A沖洗系統(tǒng)，待基線穩(wěn)定之后啟動梯度程序，分5步繪制溶劑B從0%到*的梯度變化曲線。計算B溶劑變化引起的每一步對應的響應信號值的變化值，重復儀器校準兩次，計算結(jié)果。
(4) 柱箱溫度設定點誤差和穩(wěn)定性校正
a.修復將數(shù)字溫度計探頭置于色譜柱恒溫器之中與色譜柱相同的位置，并選擇35℃和45（也可根據(jù)工作溫度設定）進行儀器校準。
b.按儀器說明書操作，接通電源，升溫。溫度穩(wěn)定之后，記錄溫度計的讀數(shù)，并開始計時。后，每10分鐘記錄一次讀數(shù)，共7次，計算平均值。
c. 平均值與設定值間的差值為柱溫設定值的誤差，7個讀數(shù)中的極大值與最小值之差是柱溫穩(wěn)定性。
（5）探測器標定（以紫外可見光探測器和二極管陣列探測器為例）。
（6）定性和定量重復性儀器校準
將儀器各部分聯(lián)接好，選用C18色譜柱，用*甲醇為流動相，流量為1.0mL/min，根據(jù)儀器配置的檢測器，選擇相應的測量參數(shù)如紫外可見光檢測器和二極管陣列檢測器波長設定為254 nm，靈敏度選擇適中，基線穩(wěn)定之后由進樣系統(tǒng)注入一定體積的1.0×10-4 g/mL萘-甲醇溶液標準物質(zhì)，其他檢測器選擇相應的參數(shù)。連續(xù)測定6次，記錄色譜峰的保留時間和峰面積，最終計算相對標準差。
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